Becoming With Schizophyllum Commune: Lag en steril kultur fra funnet sopp: 3 trinn (med bilder)

2024 Forfatter: John Day | [email protected]. Sist endret: 2024-01-30 11:25

Denne instruksen er fokusert på å forklare hvordan du lager en steril kultur av soppen Schizophyllum Commune (vanlig navn Split Gill -sopp) på en petriskål ved hjelp av funnet sopp. Det er funnet at Schizophyllum Commune har over 28 000 kjønn, finnes på alle kontinenter unntatt Antarktis, og har evnen (som andre "hvite og brune råtsopp") til å bryte ned hormonforstyrrende forurensning (plast, hormon som etterligner industrielle petrokjemikalier som gjødsel Atrazine, mykneren Bisphenol-A eller det syntetiske hormonet Diethylstilbestrol).

Jeg vil gå gjennom identifikasjonsteknikker for vill sopp, hvordan du lager en petriskål med agar for næringsstoffer, og hvordan du bruker soppene du har funnet til å dyrke en steril isolert kultur i petriskålen. Andre instruktører i denne serien går over teknikker som genetisk identifisering av sopp, enkle enzymatiske analyser for å teste soppens evne til å bryte ned plast og hormon etterligne forurensning, og hvordan man lager ost med S. Commune.

Dette prosjektet kom ut av samarbeidsarbeidet til Mary Maggic, Paula Pin og meg selv under et bosted i HANGAR i Barcelona Spania høsten september 2018. For mer informasjon om prosjektet kan du lese om ~~ eller hoppe over alle Bla Bla og gå rett til trinn 1 for opplæringen:)

Bilder er fra Schizophyllum Commune Fanzine ~ -filene kan lastes ned gratis her

Under oppholdet var våre tre hovedmål:

1 ~ Forskning og fordøy den vitenskapelige litteraturen om Schizophyllum Commune, og det er forskjellige interaksjoner med hormoner og hormonforstyrrende petrokjemiske forurensninger. S. Commune er en av mange "hvite og brune råte" sopp med evnen til å bryte ned forurensning av hormonelle og hormonforstyrrende stoffer. Disse soppene lever av trær ved å skille ut "lignocellulosiske" enzymer fra sine nettverkskropper eller "mycelia", og enzymene er i stand til å bryte ned cellulose og lignin som trær er laget av. På grunn av strukturelle likheter mellom cellulose, lignin og EDS / hormoner som Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol og Nonylphenols, kan de "lignocellulosiske" enzymene som utskilles av soppene også bryte ned et stort utvalg av giftstoffer. I tillegg til dette produserer S. Commune immunstimulerende polysakkarider som er nyttige som kreftforebyggende midler og behandlinger (Godkjent i Japan for behandling av livmorhalskreft), kan forbedre fytoøstrogene egenskaper til visse planter gjennom gjæring, kan brukes i stedet for løpe og lactobacilius i ostekremeprosesser og produsere enzymer som oppløser trombinpropper (nyttig ved behandling av trombose). Merkelig nok brukes de samme "beta-glukanene" som kan ekstraheres med kokende vann som kreftbehandlinger og immunstimulerende midler, også av petroleumsindustrien for å øke oljeutbyttet, og knytter S. Commune i en tilbakemeldingssløyfe fra bizar til produksjonen av hormonforstyrrende petrokjemi er det i stand til å bryte ned og rette opp.

2 ~ Utvikle DIY og DIWO (gjør det med andre) protokoller som forenkler disse mottakene for å jobbe med EDC og sopp for å oversette kodifisert vitenskapelig kunnskap til et språk som er mer tilgjengelig. Bruk disse mottakene til utdanning, til avhør, til motstand mot molekylære koloniseringer, og til å lage nye fortellinger om multispes -tilfeller og vår kollektive mutagenese.

3 ~ Utfordre den dominerende cisheteronormative, queerphobiske diskursen rundt hormonforstyrrende kjemikalier (EDC). For å sitere Malin Ah-King og Eva Haywards stipend om problemene, "Mange nyhetssteder rapporterer disse skremmende endokrine historiene fra bakgårdene våre. I et forsøk på å forgrunne disse problemene-som vi vil beskrive i følgende medier, har det oppstått en Frankenstein-metamorfose som truer sex og seksualitet. I stedet for å ta opp de mange andre helserisikoen forbundet med giftig eksponering, står de mest oppsiktsvekkende og polemiske spørsmålene for debatt og kritisk respons. Det reiser spørsmål: Hvorfor er sex mer sentralt enn kreft, autoimmun sykdom, og til og med døden. Hvilke kulturelle nerver (hvorav mange er globaliserte), utløses? Og for de av oss som har feministiske bekymringer, hvordan omorienterer vi debatten vekk fra essensialisme, sexisme og heteronormativitet? " (Giftige kjønn).

Schizophyllum Commune er en unik "hvitråtesopp" ved at den har blitt funnet å ha over 28 000 genetiske kjønn. Denne tilpasningen, mange teoretiserer, har muliggjort det utrolige genetiske mangfoldet til denne arten som eksisterer på alle kontinenter rundt om i verden unntatt Antarktis. Vi ønsket å feire den vakre seksuelle mangfoldet av denne organismen som et eksempel på biologiens raseri. Den dominerende diskursen rundt EDC i media, og til og med fra miljøaktivister fokuserer sterkt på uvitenskapelige fortellinger, at disse molekylene forårsaker visse seksualiteter eller kjønn som samfunnet vårt patologiserer, merker som ikke-normative og ofte søker å eliminere eller unngå. Ikke bare er det sex-paniske, queer-fobiske fokuset for offentlig rop om EDCs vitenskapelig urealistiske (hormoner og hormonforstyrrende stoffer gjør ikke folk queer eller trans), men det ignorerer alle de ødeleggende virkelige effektene vi kan koble til EDCs: fedme, skjoldbruskkjertelen, visse kreftformer, blant andre helserisiko.

Trinn 1: Finn Schizophyllum Commune som bor i ditt fellesskap

Sterile kulturer av laboratoriekvalitet av Schizophyllum Commune kan kjøpes for rundt $ 350 fra en mikrobiologisk kulturbank som ATCC … derfor valgte vi å dyrke fra vill sopp gratis:)

Jeg hadde det enkelt fordi jeg hadde lest om Schizophyllum Commune og merket det tilfeldigvis at det vokste på et tre foran leiligheten min en dag. Hvis du ikke er så heldig å tilfeldigvis snuble over S. Commune i nabolaget ditt, vil du dra til et skogsområde for å lete etter "brakett" sopp som vokser på sykt løvtre (trær som ser ut som de ikke gjør det for godt) eller trær som har falt. S. Commune er en av de vanligste eksisterende soppene rundt om i verden og finnes i utgangspunktet hvor som helst det er løvtre å vokse på.

Mushroomobserver.org gir en detaljert beskrivelse av hvor og når du sannsynligvis vil finne S. Commune, samt hvordan du identifiserer det og hvordan du unngår "look alikes" som kan føre til feilidentifikasjon:

"IDENTIFIKASJON: Schizophyllum kommune er lett å identifisere ved sine splittede gjeller, tett hår og vifteformet hette. Hetten er 1-4,5 cm bred og vanligvis en skall- eller vifteform med en grå til hvitaktig overflate. Basidiosporer er 5-7,5 × 2 -3 mikrometer En lignende sopp kjent som "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa er ikke så utbredt.

HABITAT: Schizophyllum commune vokser på løvtre ved å bruke enzymer for å bryte ned lignin og forårsaker "hvit råte". Så det finnes i de fleste skogsområder. Den kan bli funnet året rundt på grunn av sin evne til å tørke ut, rehydrere under bedre forhold, og deretter fortsette å spore.

Denne soppen kan være parasittisk på trær med liten diameter som er stresset av andre faktorer, for eksempel tørke.

SE UT: Plicaturopsis crispa eller “Crimped Gill” ligner på Split Gill. Den har også et skall/vifteformet fruktkropp. Hetten er imidlertid rødbrun eller gulbrun, og undersiden er veldig særegen. Den har krympet vene som gjeller som er mye annerledes enn de splittede gjellene i Schizophyllum kommune. Crimped Gill er mindre vanlig, men særegent når den blir funnet."

Trinn 2: Lag Nutrient Agar Plates for S. Commune å vokse videre

For å isolere en kultur av S. Commune trenger du noen petriskåler fylt med mat til soppen. Maltekstrakt Agar er en enkel å lage mat for S. Commune, eller "næringsmedier" som kan lages med lett tilgjengelige ingredienser. Det er også en god matkilde å bruke når du gjør enzymatiske analyseforsøk med S. Commune og andre hvite eller brune råtsopp ~ ~ denne prosessen vil bli dekket av en annen instruerbar.

MERKNAD: Hvis du hadde problemer med å finne S. Commune, er det mange andre sopp i samme familie som kan dyrkes ved hjelp av de samme prosessene og er like gode om ikke bedre til å nedbryte hormonforstyrrende forurensninger. Turkey Tail (Trametes Versicolor) har blitt funnet i mange studier som så på hundrevis av hvite og brune råtsopper som de høyeste produsentene av "lignocellulosiske" enzymer som nedbryter petrokjemisk forurensning. Østerssopp er også veldig god på dette.

Jeg gjør mitt mikrobiologiske arbeid i et samfunnsbiologisk laboratorium kalt BUGSS (Baltimore Underground Science Space) hvor jeg har tilgang til glass, digitale vekter, uteksaminerte sylindarer, en autoklav (for varme- og trykksterilisering av media), etc. Labs som dette har dukket opp rundt om i verden det siste tiåret, så det kan være lurt å sjekke denne listen for å se om det er en i nærheten av deg. Hvis du ikke har et flott fellesskapslaboratorium som dette i ditt område, må du investere i grunnleggende utstyr for denne prosessen, for eksempel:

1 ~ En digital skala for å måle ingrediensene dine nøyaktig

2 ~ En trykkoker for å sterilisere media med varme og damp

3 ~ Petriskåler, kan kjøpes på nettet ganske billig, gjenbrukbart glass eller engangsplast vil fungere, men gjenbruk er alltid bedre:)

4 ~ Noe glass for å blande ingrediensene i, sterilisere og lagre.

Hvis du ikke vil investere i det utstyret, kan du finne ferdigstøpte maltekstraktagarplater å kjøpe på nettsteder som Amazon ~ det vil bare bli dyrere i lengden hvis du planlegger å fortsette med mikrobiologisk arbeid.

Det er allerede mange flotte guider og youtube -videoer om hvordan du lager dine egne petriskåler med næringsmedier hjemme. Så i stedet for å gå i detalj på dette, vil jeg bare koble til et par - og gi oppskriften på 2% maltekstraktagar, som er næringsmediet du vil bruke.

Freshcap Musrooms: Guide til hvordan du lager agarplater for dyrking av sopp hjemme

Mykoweb: Komme i gang med soppdyrking

Maltekstraktgarn Teknisk datablad

2% maltekstraktagar (MEA) ~~ Oppskrift på 1 liter:

20 g maltekstrakt (vanlig forsyning av øl, kan kjøpes online)

15 g agar (størkningsmiddel - dette brukes til å lage mat med ofte, så det kan kjøpes online eller i noen dagligvarebutikker)

1 liter H20 (jeg bruker vanligvis vann fra omvendt osmose som kan kjøpes i de fleste dagligvarebutikker i gallonkanne)

Denne oppskriften kan enkelt endres hvis du vil lage mindre mengder. Jeg lager for eksempel ofte bare 250 ml om gangen, så jeg bruker bare 5 gram maltekstrakt, 3,75 gram agar og 250 ml vann.

Trinn 3: Innokuler petriskålen med sopp

Soppen du ser kalles "fruktkroppen", den er bare en liten del av organismen. Majoriteten av kroppens kropp er gjemt i treet (eller i bakken) og tærer på treet. Denne delen av soppen kalles mycel. For å dyrke Schizophyllum Communes hvite filamentøse, tentakulære, rhizomatiske, myceliske kropp på en petriskål, tar du et utvalg av stammen, steriliserer og legger på MEA -tallerkenene dine. Mycel vil vokse fra den steriliserte soppstamkjerneprøven og kolonisere petriskålen, og ser ut som en hvit bomullsmatt.

Du vil trenge:

• Maltekstrakt -agarplatene (MEA) du forberedte i forrige trinn
• 70% isopropylalkohol (sprit) og en sprayflaske
• Tørkepapir
• Skalpell, eller bare en barberkniv i rustfritt stål vil fungere
• metall pinsett
• hansker
• En flamme - jeg bruker en alkolampe for sterilisering av instrumenter, NonDisjunction har en flott opplæring om hvordan du lager en her.
• Steril overflate å kutte på (jeg brukte nettopp en steril petriskål til dette)
• Parafilm, en parafinfilm som brukes til å forsegle petriskåler - du kan også bare bruke maskeringstape hvis du ikke har dette

STERIL TEKNIKK:

Det viktigste du vil huske på når du prøver å bruke steril teknikk, er at bakterier og sporer kontinuerlig faller i luften, så du vil holde petriskålene dekket så mye som mulig. Når du løfter lokkene for å helle medier eller vaksinere, er det alltid best å holde lokket like over fatet, slik at du får tilgang til innsiden horisontalt, men holder lokket over fatet for å forhindre at bakterier faller i. For det andre kan du er et gigantisk konglomerat av mennesker, bakterier, sopp og andre organismer ~~ selv om du ikke kan se det, omgir du en tett sky av mikrober som sprer seg ut av kroppen din. I stedet for å bare sitte på overflaten av huden din, strekker mikrobiomet seg ut i luften ~~ sååååå, aldri vift hendene over petriskålen, eller len deg over det åpne fatet for å se inn. Og bruk hansker hvis du har dem;)

SETT OPP DIT HALVSTERILE ARBEIDSOMRÅDE

Velg en ikke-porøs arbeidsflate fri for rusk og søppel. Spray området ned med 70% isopropylalkoholoppløsning og tørk det av med et papirhåndkle. Plasser flammen i midten av arbeidsområdet og tenne den. Du vil jobbe så nær flammen som mulig fordi det skaper et lite sterilt felt rundt det. Legg MEA -platene på den ene siden og soppprøven på en steril skjæreflate på den andre siden. Jeg bruker vanligvis en steril petriskål som min sterile skjæreflate i tillegg til en redskapsstøtte. Hell litt isopropylalkohol i et lite glass - du bruker dette til å sterilisere bladet og pinsetten mens du jobber.

*¡~ INOKULERE ~!*

Før du gjør noe, steriliser bladet og pinsetten ved å dyppe dem ned i isopropylalkjen og deretter holde dem litt over flammen. Etter sterilisering, legg dem på den sterile skjæreflaten hvis du setter dem ned. Bruk pinsetten, hold soppstammen stille og skjær en bit av enden av den. Ta denne biten og kutt alle sidene slik at du ender opp med en liten terning med soppstammekjerne med alle ytre overflater fjernet. Dette hjelper til med å bli kvitt alle de andre mikrober som lever på soppen, slik at de ikke forurenser kulturen din. Dypp deretter stammekjernen i isopropylet i omtrent 30 sekunder, trekk den ut og la den tørke i flammens sterile felt (ikke bruk flammen til å tørke den, dette vil drepe soppen). Flamme sterilisere pinsetten din igjen mens du venter på at kjernen skal tørke. Løft deretter lokket på en av MEA -platene dine akkurat nok til å skyve pinsetten inn fra siden, og bruk den steriliserte pinsetten til å plassere stengelkjernen i midten av platen. Forsegle tallerkenen med parafilm, og i løpet av de neste ukene bør du se S. Commune mycelium kolonisere platen.

Jeg lager vanligvis flere plater når jeg jobber med ville prøver, slik at hvis jeg får forurensning, er det mer sannsynlig at jeg har minst en ren kultur.